Dans l’optique d’optimiser vos produits existants, de lancer de nouveaux produits ou encore, dans le cadre d’une évolution réglementaire, la validation analytique de méthode de dosage par HPLC permet de réaliser des analyses spécifiques à vos matrices.
Pourquoi réaliser une validation analytique d'une méthode de dosage
Quel que soit votre domaine d’activité, la validation analytique consiste à garantir les performances d’une méthode d’analyse par examen et apport de preuves objectives, au regard de l’usage attendu du produit. Elle permet également d’en estimer ses incertitudes de mesure. Quelle que soit la méthode d’analyse, voici les principaux critères à considérer pour valider une méthode analytique :
A FILAB, nous vous proposons aujourd’hui des services de validation analytique sur-mesure ou vous aidons dans le cadre de la mise en place d’études de validation de méthodes et dans le calcul statistique.
Quels sont les référentiels existants pour une validation analytique d'une méthode de dosage par HPLC en laboratoire ?
De nombreux référentiels disponibles abordent la validation de méthodes analytiques et les critères d’acceptation :
ISO 17025 : Exigences générales concernant la compétence des laboratoires d’étalonnages et d’essais
ISO 5725-2:1994 : Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure — Partie 2: Méthode de base pour la détermination de la répétabilité et de la reproductibilité d’une méthode de mesure normalisée
Guide Citac / Eurachem : Guide pour la Qualité en Chimie analytique
ISO 5725-1:1994 : Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure — Partie 1: Principes généraux et définitions
FDA Guidance for Industry (July 2015): Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics
NF V03-110 Mai 2010 : Analyse des produits agricoles et alimentaires – Protocole de caractérisation en vue de la validation d’une méthode d’analyse quantitative par construction du profil d’exactitude
Guide de validation analytique : rapport d’une commission SFSTP – I : méthodologie.
La HPLC, technique d'analyse phare pour la validation analytique d'une méthode de dosage
La chromatographie en phase liquide (HPLC) est une technique analytique utilisée pour séparer, identifier et quantifier des composés dans une solution. En somme, cette méthode permet de dissocier les molécules présentes en fonction de leurs caractéristiques physico-chimiques.
L’analyse HPLC utilise une colonne chromatographique remplie de particules stationnaires, qui sont séparées les unes des autres par une phase mobile liquide. Vos échantillons sont injectés dans le système HPLC, et déplacés à travers la colonne sous l’influence de la phase mobile. Cette technique repose sur la séparation des molécules en fonction de leur taille, de leur polarité ou de leur affinité pour la phase stationnaire. Elle est largement utilisée dans les industries de la chimie, médicale et alimentaire, pour identifier les composés de manière précise et fiable.
Les autres moyens de validations analytiques présents à FILAB
Le laboratoire FILAB propose à ses clients des services de Validation analytique d’une méthode de dosage par HPLC
Notre FAQ
La validation démontre que la méthode est adaptée à son usage prévu pour les composés, concentrations et échantillons concernés. Une séparation satisfaisante sur un standard ne suffit pas à établir ses performances dans un produit complexe. Le protocole doit donc tenir compte de la préparation, des interférences et des critères nécessaires à la décision analytique.
Les caractéristiques retenues dépendent de l’objectif : sélectivité, justesse, fidélité et domaine de mesure sont notamment à examiner. Les limites de détection ou de quantification, la stabilité et la robustesse peuvent également être pertinentes. Le programme doit justifier les essais et critères d’acceptation ; tous les paramètres ne s’évaluent pas de la même manière pour chaque usage.
La répétabilité étudie la dispersion des résultats dans des conditions rapprochées et définies. La fidélité intermédiaire examine des variations au sein du laboratoire, par exemple entre jours, analystes ou équipements. Ces études renseignent sur la variabilité de la méthode et doivent être distinguées de la justesse, qui concerne son éventuel écart par rapport à une référence.
La relation entre réponse et concentration ne démontre pas à elle seule la qualité des résultats. La sélectivité, la justesse et la fidélité doivent aussi être examinées sur le domaine utile. Une méthode peut présenter une calibration linéaire tout en subissant une interférence ou une récupération insuffisante lors de la préparation de l’échantillon.
Le choix dépend du produit, de l’usage et du cadre réglementaire du dossier. Pour les procédures analytiques pharmaceutiques, l’ICH Q2(R2) constitue la version actuelle du guide de validation présentée par l’EMA. D’autres normes ou guides peuvent être pertinents selon le secteur ; ils ne se substituent pas à la définition de l’objectif analytique. Consulter l’ICH Q2(R2).
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