Lors du développement ou du contrôle d’un médicament, l’apparition d’un pic chromatographique non identifié peut soulever plusieurs questions : quelle est cette impureté ? D’où provient-elle ? Est-elle liée au procédé de fabrication ou à une dégradation du produit ?
La LC-HRMS (chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse haute résolution) constitue une technique particulièrement adaptée à ce type d’investigation. Elle permet de détecter des composés inconnus et d’obtenir des informations précises sur leur masse et leur structure.
Pourquoi analyser les impuretés d’un médicament ?
Les impuretés peuvent provenir de différentes étapes : matières premières, intermédiaires de synthèse, réactions secondaires, procédés de fabrication ou encore dégradation du médicament au cours du stockage.
Leur identification permet notamment de :
- comprendre leur origine ;
- évaluer leur évolution au cours du temps ;
- distinguer une impureté de synthèse d’un produit de dégradation ;
- orienter les investigations nécessaires pour maîtriser le procédé.
Cette démarche s’inscrit notamment dans le cadre de la maîtrise des impuretés attendue pour les substances et produits pharmaceutiques.
Comment la LC-HRMS permet-elle d’identifier une impureté ?
L’analyse repose généralement sur plusieurs niveaux d’information.
La LC sépare les différents constituants de l’échantillon. La HRMS permet ensuite de détecter les composés présents, y compris lorsque leur structure n’est pas connue au préalable.
La mesure de la masse exacte permet d’obtenir une formule moléculaire potentielle et de réduire considérablement le nombre de structures envisageables.
Le composé suspect est ensuite fragmenté afin d’obtenir un profil de fragmentation. Ces informations permettent de proposer ou d'affiner sa structure.
Les données obtenues peuvent être comparées à des bases de données, à des données bibliographiques ou à un standard de référence lorsqu’il est disponible.
La HRMS est particulièrement intéressante dans ce contexte car elle associe masse exacte, composition élémentaire potentielle et informations structurales issues de la fragmentation.
LC-HRMS et produits de dégradation
La LC-HRMS peut également être utilisée pour rechercher des produits de dégradation.
Le laboratoire peut comparer un médicament avant et après exposition à différentes conditions : température, lumière, oxydation, hydrolyse acide ou basique, par exemple.
L’objectif est alors d’identifier les nouveaux signaux apparaissant après vieillissement et de déterminer leur origine probable.
Cas concret : une impureté apparaît après stockage
Dans le cadre du suivi de stabilité d’un médicament, un laboratoire pharmaceutique constate l’apparition progressive d’un nouveau pic chromatographique après plusieurs semaines de stockage.
Pour identifier ce composé, le laboratoire réalise une analyse LC-HRMS sur :
- le produit initial ;
- le produit après stockage ;
- un blanc analytique.
La comparaison met en évidence un signal uniquement présent dans l’échantillon stocké. La mesure de masse exacte permet de proposer une formule moléculaire, puis l’analyse MS/MS apporte des informations sur les différents fragments de la molécule.
Le croisement de ces résultats avec les données de stabilité permet d’orienter l’identification vers un produit de dégradation du principe actif.
Cette investigation permet ainsi au client de mieux comprendre l’évolution de son produit et d’orienter les actions nécessaires pour maîtriser cette impureté.
Pourquoi faire appel à un laboratoire spécialisé dans l'analyse par LC-HRMS ?
L’identification d’une impureté inconnue ne repose pas uniquement sur la détection d’un pic. Elle nécessite de croiser les données chromatographiques, la masse exacte, les spectres MS/MS et le contexte de fabrication ou de stabilité du produit.
Selon le niveau de confirmation recherché, la LC-HRMS peut également être complétée par d’autres techniques analytiques, telles que la LC-MS/MS, la RMN, la GC-MS ou l’analyse élémentaire.
Grâce à son expertise en chimie analytique, FILAB accompagne les industriels pharmaceutiques dans l’identification et la caractérisation d’impuretés inconnues, notamment lors d’investigations de stabilité, de développement ou de résolution de problèmes.
Pour conclure
La LC-HRMS permet de détecter, caractériser et orienter l’identification d’impuretés inconnues dans les médicaments. En combinant séparation chromatographique, masse exacte et fragmentation MS/MS, elle constitue un outil particulièrement adapté aux investigations sur les impuretés et produits de dégradation.
Notre FAQ
Oui. Elle permet de déterminer sa masse exacte, de proposer une formule moléculaire et d’obtenir des informations structurales grâce à la MS/MS.
Oui. La comparaison d’échantillons avant et après vieillissement permet notamment de rechercher et caractériser les nouveaux composés formés.
Pas toujours. Selon le niveau de certitude recherché, une confirmation par standard de référence ou par une technique complémentaire peut être nécessaire.
Elle peut fournir des éléments permettant d’orienter son origine. L’interprétation doit toutefois être croisée avec les données du procédé, des matières premières et de la stabilité.
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